 | | 1560年ジェルバの戦いに遠征参加して惨敗した騎士団は,マルタ島へ次の侵攻があることを危惧した。そこで,ビルグ(包囲戦後,勝利を記念してヴィットリオーザと改名)の聖アンジェロ砦を強化し,セングレアに聖ミケーレ砦,シベラス半島の先端に聖エルモ砦を6か月で建設した。1565年,オスマントルコの大艦隊がマルタを包囲。マルタ島の住民は家財や家畜を連れて,イムディーナ,ビルグ,セングレアの城壁内へ避難。トルコは先ず聖エルモ砦を攻撃。約１ヶ月に渡る大激戦の末,聖エルモ砦が陥落したが,騎士団はビルグ,セングレアを死守して防戦。約４か月間の攻防の後,シチリアからスペインの援軍到着。すでに多くの犠牲者を出していたトルコ軍は,兵器の補給が遅れ,その絶大な勢力を維持できず撤退した。この大包囲戦(The Great Siege)は,16世紀におけるオスマントルコの最初の真の敗北であり,聖ヨハネ騎士団はヨーロッパ中から賞賛された。71歳で自ら戦陣に立った騎士団総長ジャン・ド・ラ・ヴァレッテは,この防衛戦の辛苦から,シベラス半島の要塞都市化に着手した。新たな要塞都市は彼に因んで「ヴァレッタ」と名づけられ,マルタの首都となる。
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